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      • 天根試劑盒
      天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105
      天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105采用硅膠膜吸附技術,結合質粒DNA,操作簡單、快速。每次處理1-4 ml 過夜培養的細菌培養液,僅需8 min 即可提取多至24 μg 的質粒DNA。使用本試劑盒提取的質粒DNA 可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、 文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規的傳代細胞等。
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      天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105

      DP105

      產品簡介

      天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105采用硅膠膜吸附技術,結合質粒DNA,操作簡單、快速。每次處理1-4 ml 過夜培養的細菌培養液,僅需 8 min 即可提取多至24 μg 的質粒DNA。使用本試劑盒提取的質粒DNA 可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、 文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規的傳代細胞等。

      產品特點:

      ■ 快速:步驟少,操作簡單,僅需8 min。

      ■ 高效:可提取菌體85% 以上質粒DNA。

      ■ 配備了獨特的TIANRed 試劑,可以清晰辨明抽提過程中樣本的裂

      解程度,確保得到高效率、高純度的質粒DNA。

      提取得率

      質粒類型

      菌液量

      得率

      質粒

      低拷貝

      1-4 ml

      3-10 μg

      pBR322, pACYC及其衍生載體

      pSC101及其衍生載體,

      SuperCos, pWE15

      高拷貝

      1-4 ml

      6-24 μg

      pTZ, pUC, pBS, pGM-T

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      快速質粒提取試劑盒顏色變化


      使用注意事項

       請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。 

      1.溶液P1在使用前先加入RNase A和TIANRed(將試劑盒中提供的RNase A和TIANRed全 部加入),混勻,置于2-8℃保存。 2.使用前請先檢查溶液P2和P5是否出現渾濁,如有混濁現象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。 

      3.注意不要直接接觸溶液P2和P5,使用后應立即蓋緊蓋子。 

      4.所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心,速度為12,000 rpm (~13,400×g )。

      5.提取的質粒量與細菌培養濃度、質??截悢档纫蛩赜嘘P。

       6. TIANRed的使用方法: TIANRed是一種指示劑,用以指示整個操作的正確性,對人體無 害。使用時按照TIANRed:溶液P1=1:200進行混合,徹底顛倒混勻,混勻后的溶液為澄清 的紅色。將混勻后的溶液加入到收集好的菌體中徹底混勻,由于菌體的存在,混勻后的溶液為渾濁的紅色;添加溶液P2之后徹底混勻后,溶液的顏色為澄清的紫色,則說明充 分裂解;再添加溶液P5至徹底混勻后,溶液為澄清的黃色,說明中和復性充分。

      實驗操作步驟說明:

       使用前請先在漂洗液PWT中加入CH2O6,加入體積請參照瓶上的標簽。

       1. 取1-4 ml過夜培養的菌液,加入離心管中,使用常規臺式離心機,12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集 到一個離心管中)。

       2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入150 μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNase A和 TIANRed),使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌沉淀。 注意:如果有未徹底混勻的菌塊,會影響裂解,導致提取量和純度偏低。 

      TIANRed試劑的加入對于后續PCR、酶切和測序都沒有影響。使用時按照TIANRed:溶液 P1=1:200進行混合,徹底顛倒混勻,混勻后的溶液為澄清的紅色。將混勻后的溶液加入 到收集好的菌體中徹底混勻,由于菌體的存在,混勻后的溶液為渾濁的紅色。 

      3. 向離心管中加入150 μl溶液P2,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。 注意:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免污染基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠,如果 未變得清亮,可能由于菌體過多,裂解不徹底,應減少菌體量。 由于使用了TIANRed,添加溶液P2徹底混勻后,溶液的顏色為澄清的紫色。如果在紫色中 混雜有渾濁的紅色,則說明裂解不充分,繼續混勻直至溶液顏色完全變為澄清的紫色。 

      4. 向離心管中加入350 μl溶液P5,立即快速地上下顛倒混勻12-20次,混勻,此時將出 現絮狀沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min。

       注意:加入溶液P5后應立即混合,應快速上下顛倒混勻,避免產生局部沉淀。上清中含 有少量微小白色沉淀對后續實驗沒有任何影響。如果上清中存在大量微小白色沉淀,可 再次離心后取上清。由于使用了TIANRed,添加溶液P5徹底混勻后,溶液為澄清的黃 色,如果在黃色中混有紫色,則說明復性不充分,繼續混勻至溶液顏色完全變為澄清的 黃色。 

      5. 將上一步收集的上清液用移液器轉移到吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中),注意盡量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱 CP3放入收集管中。

      6. 向吸附柱CP3中加入300 μl漂洗液PWT,12,000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP3放入收集管中。 

      7. 將吸附柱CP3放入收集管中, 12,000 rpm (~13,400×g) 離心1 min,目的是將吸附柱中殘 余的漂洗液去除。

      8. 將吸附柱CP3置于一個干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫緩沖液 TB,12, 000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec將質粒溶液收集到離心管中。 

      注意:洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。


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